常規病理技術常用的固定劑為 4%甲醛，脫水、透明的主要試劑為乙醇和二甲苯。已有研究中證實，常規病理技術應用中相關的試劑多具有較強的刺激性和揮發性，不但病理技術應用存在一定局限，且還會對相關人員的身體健康造成不良影響。因此，尋找一種對人體無毒、無害且安全的替代品已成為病理技術工作者的一種迫切愿望。本研究分別通過 GS 試劑和傳統試劑制備組織切片，并將其分別應用在病理自動化染色的過程中，比較不同方法、不同試劑制備的組織切片的染色效果，現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 選取湘鄉市人民醫院自 2013 年 5月~2015 年 2 月期間臨床送檢的不同活體組織病理標本共計4014 例，包括乳腺、結直腸、食管、胃、甲狀腺腫物、淋巴結、皮膚、膽囊、脂肪、子宮宮頸、肝臟、扁桃體及腎穿刺組織等不同部分的新鮮病理組織，每份標本都取材 2 個組織塊（組織塊的大小為1.5 cm×1.0 cm×0.2 cm），并分別采用 GS 環保套液石蠟制片法和傳統的石蠟制片法對組織進行處理制片（固定、脫水、透明、浸蠟），然后將其進行病理自動化染色，將采用 GS 環保套液處理的標本作為觀察組，將傳統試劑處理的標本作為對照組，比較兩組組織標本的制片、染色效果。
1.2 方法 采用同一型號全自動脫水機、石蠟切片機、生物組織自動包埋機以及全自動染色機等。GS 環保套液由哈爾濱格林公司研究開發生產的。
1.2.1 對照組 本組組織樣本所采用的是經傳統石蠟制片法制片并采用傳統 HE 染色法染色方法。制片方法為：采用 4%的中性甲醛（或者 95%的乙醇和甲醛溶液以 9∶1 的比例配成固定液）對組織進行固定，經乙醇脫水（經濃度為 70%、80%、95%的乙醇和無水乙醇進行梯度脫水），二甲苯透明，浸臘后使用石蠟包埋。將其切成 4~5 μm 厚的切片。染色方法為：切片 70℃烤片 10 min;分別使用二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ脫蠟各 5 min,然后使用無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇梯度脫水各 2 min,自來水沖洗3 min;蘇木精染色 8 min,自來水沖洗 3 min;1%鹽酸分化液分化 7 s,自來水沖洗；藍化液 1 min,自來水沖洗 1 min;1%伊紅染色 3 min,自來水沖洗 7 s;70%乙醇、95%乙醇各 10 s;無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各 3 min;二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各 3 min;中性樹膠封固。
1.2.2 觀察組 本組組織樣本所采用的是經過 GS 環保染色試劑制片并采用全自動 HE 染色方法。制片方法為：采用 GS無醛固定液對組織進行固定，分別采用脫水液、透明液、浸蠟液分別進行脫水、透明和包埋，采用石蠟切片機進行切片處理。對于標本體積較小的腎穿刺標本而言，需要采用手工單獨處理的方法進行制片[1],制片的步驟同上。染色方法為：切片 70℃烤片10 min;分別使用 GS 脫蠟液Ⅰ和 GS 脫蠟液Ⅱ脫蠟 5 min;然后使用無水乙醇、95%乙醇脫水各 30 s,自來水沖洗 2 min;蘇木精染色 4 min,自來水沖洗 1 min;1%鹽酸酒精分化 5 s,自來水沖洗 3 min;藍化液染色 1 min,自來水沖洗 1 min;1%伊紅染色2 min,自來水沖洗 10 s;除浮染液 10 s;無水乙醇 1 min;除水透明 1 min;透明 1 min;無苯封片膠封固。
1.3 統計學處理 用 SPSS.17.0 統計軟件進行數據處理，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用 t 檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用 χ2檢驗；以 P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
4014 例患者的病理組織經 GS 環保套液制片與經傳統石蠟制片法制片后，比較其組織切片可見，觀察組經 GS 環保套液制片的組織切片效果更加良好，均未出現脫水不完全，組織變脆和變硬的情況；2 種方法制片后經 HE 染色，經 GS 環保套液染色的時間更短（P<0.05），且經 HE 染色后，染色更加均勻，組織細胞的結果清晰，細胞間的裂隙較少。見表 1.
3 討論
在常規的病理技術工作中，常需要對病理組織樣本進行制片染色來對其進行分析和研究，但是在脫水、固定等過程中常用的試劑，如甲醛、二甲苯等都具有十分強烈的揮發性和刺激性[2-5],不僅對實驗室工作人員的身體健康會產生較大的危害，還會對環境造成很大的污染[6].因而，尋找性能穩定的能夠代替甲醛、二甲苯等有害試劑的無毒、環保試劑對于病理技術工作人員和環境保護都具有十分重要的意義，GS 環保試劑應運而生。
本研究采用了哈爾濱格林公司[7]開發研制的 GS 環保試劑和傳統的甲醛、二甲苯試劑對不同部位的病理組織標本進行制片和染色，結果可見 GS 試劑不僅在制片過程中具有更強的滲透性，且能夠有效縮短染色過程中的脫水時間，保證組織的細胞能保持原有的結構，不會發生過度脫水而致收縮的現象；由于 GS 環保套液中的蘇木精染液著色迅速，分化后沖洗時間短，也提高了染液的穩定性。在切片的時候，不論對切片的厚度要求怎樣，都能發現切片中的組織染色均勻完整，且在顯微鏡下細胞核和細胞質的顏色分明，色澤十分亮麗鮮艷，有利于更加清晰直觀的觀察病理組織的細胞結構[8].
綜上所述，在病理技術工作中，采用 GS 環保試劑代替傳統的甲醛和二甲苯具有無毒、無污染、無異味釋放的優點，染色效果更加滿意，且安全性好，制片和染色時間短，值得在病理技術工作中進行推廣。
參考文獻：
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